S.E.M.S                                               DGETI

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA No. 1

“ PREPARACION, FIJACIÓN Y COLORACION SIMPLE”

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

“PROCESAR CULTIVOS BACTEREOLOGICOS”

4º DM LAB CLÍNICO

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

Objetivo:

Realizar  técnicas de preparación de frotis, de fijación y de coloración, obtenidos de medios sólidos y líquidos. Identificar las principales formas bacterianas y la importancia de tinciones simples en la caracterización morfológica de estos microrganismos.

Fundamento:

Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida. Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados. La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.

Las bacterias se caracterizan por ser microorganismos unicelulares que carecen de membrana nuclear, en las cuales el material nuclear está organizado en una tira continua, a veces circular, contenido en el citoplasma, presentan un actividad metabólica y se dividen por fisión binaria, son organismos sofisticados y altamente adaptables a cambios del medio ambiente. Debido a su ubicuidad y su alta capacidad de adaptación su importancia en el campo medico como agentes causales de daño es altamente notable.

En tamaño y forma las bacterias de importancia médica son microorganismos muy pequeños que se presentan en tres formas generales: esféricos designados como cocos, organismos en forma de bastón designados como bacilos, y de formas espirilas, dentro de estas tres mencionadas anteriormente se encuentran otros microorganismos que adoptan variantes morfológicas designadas como formas pleomórficas.

Debido al pequeño tamaño de la mayoría de los microorganismos, se requiere de un microscopio óptico, ya sea de campo claro, en el que la observación de células vivas es limitada debido a que las células son incoloras y permiten el paso de una gran cantidad de luz. La observación de frotis teñidos es más recomendable. El frotis se prepara haciendo una extensión de los microorganismos sobre una superficie transparente, en la cual se fijan y se tiñen los microorganismos. De acuerdo al número de soluciones colorantes y a los objetivos de estudio se pueden realizar diferentes tipos de tinciones como lo son: simple, diferencial, negativa y selectiva. Los colorantes más utilizados son sales formadas por iones coloridos cargados conocidos como cromóforos. Por ejemplo:

Cloruro de azul de metileno à azul de metileno + Cl (cromóforo)

Si el cromóforo es un ion positivo el colorante es de tipo básico, pero si la carga es negativa será de tipo ácido. La mayoría de las bacterias son teñidas por colorantes básicos, que permean la pared celular y se adhieren por enlaces iónicos débiles a moléculas con cargas negativas de la célula bacterianas.

Material:

ü  5 portaobjetos

ü  Piseta

ü  Cuba

ü  Microscopio

ü  Asa de platino

Reactivos: ü  Azul de metileno ü  Yodo lugol ü  Fenol ü  Aceite de inmersión ü  Agua destilada

Cultivos solidos

ü  Exudado vaginal

ü  Uroanálisis

ü  Faríngeo

Muestras biológicas:

ü  Heces

ü  Orina

Preparación de frotis:

1.      Lavar perfectamente portaobjetos, secarlos con papel y rotularlos dependiendo de la muestra que se colocara.

2.      Centrifugar la orina y decantar para obtener sedimento.

d

3.      Esterilizar el asa al fuego del mechero.

.      Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra las bacterias contenidas en esta sean destruidas.   Colocar el sedimento en un porta objetos con una gota de agua destilada y diluir lentamente, para después  colocarle un cubreobjetos.

      

      Para los cultivos sólidos,  colocar una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra del cultivo (colonia), extenderla suavemente y dejar secar al aire.

En el caso de las  heces, colocar una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos y con ayuda del asa de platino colocar una pequeña muestra de heces por lo regular donde exista sangre o moco, esta diluirla y colocarle una gota de yodo lugol al final colocarle un cubreobjetos.

Fijación de frotis:

1.      Los cultivos de los medios sólidos completamente secos se fijaran con calor. Para esto se pasara el frotis rápidamente  de 2 a 3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero.

2.      Palpar la parte inferior del portaobjetos con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.

Tinción simple:

1.      Cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante 30 segundos a 1 minuto.

.      Eliminar el exceso de colorante con lavado suave al agua corriente o con la ayuda de una piseta con agua.

3.      Dejar secar al aire.

Resultados:

Quiste de Entamoeba

40X

Cristales en orina.

100x

Cristales en forma más abundante.

40x

Conclusión:

Realizar un frotis, pudiera parecer muy sencillo, pero lo más importante radica en saber interpretar sus resultados, ya que de ellos dependen los diagnósticos médicos, y por tanto la salud del paciente, por ello es necesario practicar mas y mas, para dominar su preparación, su manejo y con todo ello esta práctica que es tan sencilla pueda dar buenos resultados en ámbitos laborales.

Además nos enseña a seguir manejando distintas muestras biológicas, es decir que va tomado de la mano con prácticas anteriores, conjuntando conocimientos que más tarde nos servirán de mucho, siendo así nuestra preparación un tanto más completa.

Fuentes de consulta:

DOCUMENTOS:

·            Preparación de un frotis bacteriano, CONSULTADO EN:www.joseacortes.com › prácticas de laboratorio

·            http://www.monografias.com/trabajos15/tinciones/tinciones.shtm

·            www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

Consultados el día 18 de marzo. 5:38 PM

 

RECUENTO DE ERITROCITOS

S.E.M.S                                               DGETI

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA No. 4

“RECUENTO DE ERITROCITOS”

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

“REALIZAR BIOMETRÍA HEMÁTICA”

4º DM LAB CLÍNICO

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

v OBJETIVO

Aprender a realizar un recuento de globulos rojos en una determinada muestra samguinea, ademas de saber obtener e interpretar los resultados de una manera correcta, para que de esta forma estos sirvan de ayuda al momento de diagnosticar una enfermedad del tipo hematologico, tal es el caso de las anemias o de las policitemias. Ademas del uso y manejo correcto de siertos materiales a utilizar como lo son la camara de Neubauer y la pipeta de Thoma.

v FUNDAMENTO

Esta tecnica se basa en el hecho de utilizar un líquido diluyente que permita de sierta forma “diluir” es decir disminuir la concentracion de eritrocitos, para facilitar su conteo, asi como tambien ayude a destruir otro tipo de celulas que no se deseen apresiar ni contar (leucocitos y plaquetas). En la mayoria de los casos el diluyente mas utilizado es el liquido de Hayem, aunque es posible utilizar algunas soluciones como la de Gower, de Dacie o bien simplemente solución salina de cloruro de sodio al 0.9%

v MATERIAL:

·         Camara de neubauer.

·         Microscopio

·         Pipeta de Thoma

·         Equipo para venopuncion

v REACTIVOS:

·         Diluyente de Hayem

 

v PROCEDIMIENTO:

1.-Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar sangre capilar.

2.-Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para realizar una dilución de 1/200. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente.

3.-Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem) y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101.

En esta imagen se tiene ya la dilución entre la sangre y el líquido de Hayem

4.-Se hace rotar manualmente de 2 a 3 minutos la pipeta para favorecer la dilucion.

 5.-Descartar las primeras 3 a 4 gotas del tallo, para despues colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad permitira que se llene exactamente.

6.-Dejar en reposo por 3 minutos.

7.-Observar al microscopio enfocando  a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadrado grande central de la cámara sólo en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).

8.-En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado pequeño de recuento y no se consideran los correspondientes a los límites inferior y derecho. Se hace el recuento en cuadricula central, las cuatro esquinas y el centro.

v RESULTADOS:

·         Se suman el total ne globulos rojos contados en los 5 cuadros.

(Nº de eritrocitos contados X Dilucion X 10 X 400) / 80 = eritrocitos/mm3

                    

·         O  simplemente añadir cuatro ceros a la derecha de la cantidad final de eritrocitos contados.

v VALORES DE REFERENCIA:

·         Hombres 4 500 000 - 5 500 000

·         Mujeres 4 000 000 - 5 000 000

·         Niños (4 años) 4 200 000 - 5 200 000

·         Lactantes (1 -6 meses) 3 800 000 - 5 200 000

·         Recién nacidos 5 000 000 - 6 000 000

v RESULTADOS DE LA MUESTRA ANALISADA:

Despues de trabajar y realizar el conteo, se registro un numero total de 529 eritocitos entre los 5 cuadros indicados, con lo cual se efectuaron los calculos, o simplemente se le agrego cuatro ceros, obteniendo asi  un resultados final de: 5,290,000 eritrocitos/ mm3.

Ya comparando con los valores de referencia, se establecio primeramente que la muestra pertenecia a un hombre, de tal forma  podemos decir que se encuentra entre los valores normales.

Fuentes de información:Documento PDF “HEMATOLOGIA YBIOQUIMICA SANGUINEA” consultado en encontroiberico.no.sapo.pt/docs/Hematologia_RMolina.pdf

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

S.E.M.S                                               DGETI

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLÓGICO Industrial y de Servicios No. 199

PRACTICA No. 3

“DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO”

ALUMNO: VÍCTOR MANUEL MERA ÁLVAREZ

“REALIZAR BIOMETRÍA HEMÁTICA”

4º DM LAB CLÍNICO

DR. VICENTE MARTÍNEZ FRAGOSO

v OBJETIVO

Identificar que es, que nos permite conocer y sobre todo como realizar esta tecnica de laboratorio.

v FUNDAMENTO

El Hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados como un porcentaje de volumen de sangre total existente en una muestra. Se recomienda para la determinación del hematocrito utilizar sangre venosa con anticoagulante, esta determinación es importante para poder calcular los índices de Wintrobe.

El Hematocrito es una medición de la proporción del volumen que ocupan los eritrocitos en el volumen total de sangre entera en una muestra de sangre.

Mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa globular), respecto al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar. Puede expresarse en porcentaje o como valor decimal.

Hto = altura de la columna de glóbulos rojos / altura de la columna de sangre total (glóbulos rojos más plasma)

El porcentaje de una muestra centrifugada de sangre que corresponde a los eritrocitos es el hematocrito

Valores bajos de hematocrito

La disminución de glóbulos rojos en la sangre es una anemia. Se puede relacionar con diferentes condiciones, como hemorragia o leucemia.

Hay numerosos factores que pueden contribuir a desarrollar una anemia, como la baja en la ingesta de hierro, o pacientes con enfermedad renal crónica, que no generan suficiente eritropoyetina para estimular la producción de glóbulos rojos en la médula ósea. Aun así, solo se utilizan los valores de Hb para detectar si el paciente es o no anémico.

Valores altos de hematocrito

Se pueden asociar a deshidratación o hipoxia.

Patologías como la policitemia vera consisten en una desmedida producción de glóbulos rojos. En casos de enfermedad pulmonar obstructiva crónica, la hipoxia genera un aumento en la producción de eritropoyetina por el riñón, lo que puede resultar en un hematocrito alto.

ü Método de  tubo Wintrobe

v MATERIAL:

-Tubo de Wintrobe graduado de 0 - 100 mm.

-Pipetas Pasteur con bulbo de hule

-Centrífuga

-Sistema Vacutainer (Tubo lavanda)

Técnica:

1.-Llenar la sangre extraída con anticoagulante con una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma.

2.-Centrifugar a 3000 rpm por 30 minutos.

Resultados (lectura):

El tubo Wintrobe esta previsto ya de una graduacion que nos permite leer con facilidad los resultados, en este caso la muestra de sangre pertenecia a un hombre, con lo cual al haber obtenido un porcentaje de 48%, podemos decir que su porcentaje eritrocitario se encuentra dentro del rango establecido.

Valores de referencia:

Hombres: 47.0%  5.0 %

                  42%-52%

Mujeres: 42.0% 5.0%

               37%-47%

ü Método de microhematocrito

v MATERIAL:

-Tubos capilares (azules o rojos) según sea el tipo de muestra.

-Plastilina.

-Microcentrífuga

-Encendedor o cerillos.

Técnica:

 1.-Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante de  EDTA. Debe llenarse aproximadamente tres cuartas partes del tubo capilar.

2.-Sellar al fuego la parte más lejana a la sangre

3.-Centrifugar por 5 minutos a 10 000 rpm.

Resultados  

Uso de la escala:

Calcular el % de glóbulos rojos en la muestra de sangre con la ayuda de la regleta, material utilizado que consta de un soporte y dos pequeñas tiras las cuales se colocan al nivel más alto de la muestra ya centrifugada y la otra en la división que se presenta entre los dos colores obtenidos, posteriormente se obtendra el porcentaje que marque la divicion o linea que pasa justo sobre el nivel del color rojo.

Valores de referencia:

Hombres 40% - 50%

Mujeres 38% - 44%

Niños (5 años) 38% - 44%

Lactantes (3 meses) 37% - 42%

Recién nacidos 50% - 58%

Cálculos:

Otra forma de calcular el porcentaje es por medio de una regla de tres simple, en la cual se considera como el 100%, la medida total en cm, de la sangre que se centrifugo, y despues de que haber centrifugado se buelve a medir pero unicamente lo que se obtubo de eritrocitos, (parte de color rojo)

 Ejemplo:

En el caso de la muestra que se analizo, la cual pertenecia a un hombre, se realizaron los siguientes calculos:

Total de sangre que se sentrifugo: 5.4 cm

Total de eritrocitos resultantes: 2.6 cm

·         Regla de tres simple

                   5.4----100%

                   2.6---48.1%

Según el resultado podemos decir que el porcentaje eritrocitario de esta muestra se encuentra dentro de los valores de referencia. Es decir que no existe alguna anormalidad.

v FUENTES DE CONSULTA

Hematocrito - Wikipedia, la enciclopedia libre. Consultado en

es.wikipedia.org/wiki/Hematocrito el dia 4 de marzo de 2012    2:56 pm hrs.